干货分享 | CAR-T细胞效应提高全策略

在上一期的分享中，我们讨论了CAR-T治疗在实际应用中遇到的一系列局限性和挑战，包括可能导致的严重副作用如细胞因子释放综合征（CRS）和神经毒性、治疗实体瘤的疗效有限、抗原逃逸，以及CAR-T细胞在体内的持久性问题等，面对这些挑战，研究者们也给出了很多应对策略，这一期就对这些策略进行详细介绍~

多靶点CAR-T治疗了增加对肿瘤细胞的识别范围，减少因肿瘤细胞抗原丢失而导致的治疗逃逸，以及预防癌症的复发，。这种治疗方法在治疗某些类型的癌症，特别是血液癌症方面显示出了良好的效果。在结构设计上，多靶点CAR-T细胞有多种类型，例如双重CAR（Dual CAR）和串联CAR（Tandem CAR）等，它们能够在单个T细胞上表达两种不同的CAR分子，并通过独立的信号通路激活T细胞，以增强其抗肿瘤能力。

"与"和“非”开关也是提高CAR-T细胞疗法的特异性，应对免疫逃逸的重要策略。“与”（AND）门控CAR-T细胞是一种设计，它要求多个条件同时满足才能激活CAR-T细胞。例如，一个AND门控CAR-T细胞可能需要识别肿瘤细胞上的两种不同的抗原才能被激活。这种设计可以减少对非肿瘤组织的攻击，因为只有当两种特定的抗原同时存在时，CAR-T细胞才会发动攻击。“非”（NOT）门控CAR-T细胞则是另一种设计，它允许CAR-T细胞在识别到特定抗原时不被激活，或者在识别到另一个特定抗原时被抑制。这种设计可以用来防止对那些表达某些抗原的正常组织的攻击，从而减少副作用 。这些逻辑门控系统的应用，使得CAR-T细胞疗法能够更加精准地靶向肿瘤细胞，同时减少对正常细胞的损害。

BiTE和双特异性抗原有两种不同的功能。一种与TAA结合，另一种与T细胞表位（通常是CD3）具有高亲和力，CD3是一种将T细胞招募到肿瘤的适配器，与BiTE相比，双特异性抗原含有完整的抗原结构，通过Fc激活T细胞，这可能提高CAR-T细胞的肿瘤杀伤活性。将编码BiTE的序列与CAR序列一起转染到T细胞中，产生BiTE-装甲CAR-T细胞，充分利用CAR-T细胞浸润肿瘤的优势，克服肿瘤的异质性。

研究人员在CAR的结构中嵌入编码特定分子的基因序列，并通过基因转导技术将这些序列引入T细胞。经过这种改造的CAR-T细胞，在被激活时能够通过自分泌和旁分泌的方式释放细胞因子，这些细胞因子可以对抗肿瘤微环境（TME），有助于将原本难以被免疫细胞识别的“冷”肿瘤转变为更易于免疫细胞攻击的“热”肿瘤。此外，这种整合了细胞因子的CAR-T细胞在治疗某些类型的实体瘤和血液恶性肿瘤方面，也显示出了增强疗效和提高细胞持久性的可能性。

用CRISPR-Cas9基因编辑技术对健康供体来源的CAR-T细胞进行基因工程改造，是新一代异体通用型CAR-T疗法。这种疗法通过慢病毒或CRISPR-Cas9基因编辑技术改变T细胞受体（TCR）的结构域，敲除CAR-T细胞中的某些基因（如HLA-A、HLA-B、CIITA、TRAC和PD-1），从而解决免疫排斥问题，提高其对特定抗原的亲和力和特异性。现货通用型CAR-T细胞在治疗严重难治性自身免疫疾病方面具有高度安全性和有效性 。

另外也可以使用慢病毒载体将基因导入T细胞进行基因递送。如将iCasp9基因导入T细胞中，可以控制CAR-T细胞活性。iCasp9是一种经过改造的半胱天冬酶9蛋白，它在没有药物存在时处于非活性状态。使得这些细胞在特定药物的刺激下能够被诱导凋亡。

CAR-T细胞疗法的联合治疗方式在提高疗效和减少副作用方面显示出了巨大的潜力。例如，为了增强CAR-T细胞的抗肿瘤活性，研究人员正在探索与PD-1/PD-L1抗体阻断剂的联合疗法。此外，CAR-T细胞能够自我分泌免疫检查点分子，如在体外小鼠模型中分泌针对免疫检查点的抗体，这种局部分泌可能有助于减少系统性毒性。为了提高CAR-T细胞对PD-L1的抵抗力，研究人员正在通过遗传修饰，如使用CRISPR-Cas9技术敲除CAR-T细胞中的PD-1基因，以增强其在体外的功能，并有效清除体内PD-L1阳性的肿瘤异种移植物。通过联合疗法和遗传修饰，CAR-T细胞疗法的效力和持久性有望得到显著提升。

CAR分子的设计在CAR-T细胞治疗中扮演核心角色，通过调整胞外域、跨膜结构域和胞内结构域可以增加CAR-T细胞的持久性和安全性。基于十余年病毒领域的深耕，尊龙凯时生物可为研究者提供专业的CAR载体优化设计、病毒包装、以及体外功能验证和体内药效评估等一站式服务，助力科研顺利。

参考文献