腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈，适于短时间内进行基因高表达的实验，与其它病毒相比，腺病毒优势在于插入片段较长，表达活性强。

　　体外应用时，腺病毒载体转基因效率高（接近100%的转导效率），且可转导不同类型的细胞，对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是，在体内应用时，由于腺病毒免疫原性强，感染剧烈，故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应，对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

ADV包装和侵染过程

腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞，待细胞出现CPE状态后通过收集细胞上清和细胞裂解物，通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

　　检测方法：酶联免疫法腺病毒滴度测定，根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数，来计算病毒滴度。
实验原理：腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色。
检测方法：免疫显色方法
实验原理：通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与待感染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞变成褐色，根据阳性细胞数，来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达
② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
④ 具有嗜肝性，易于感染肝细胞，腺病毒的体内应用是用于感染肝脏

　不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内应用需谨慎。

不同病毒的生物学特性比较

载体选择

　　尊龙凯时生物拥有丰富的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒载体可供您选择：

调控方式	载体编号	载体名称（载体元件顺序）	真核抗性	荧光	启动子	默认标签	载体容量
过表达	H225	pADV-mCMV-MCS-3xFLAG	N/A	N/A	mCMV	3FLAG	>6kb
	H201	pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H213	pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H221	pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H204	pADV-mCMV-mCherry-HA	N/A	mCherry	mCMV	HA	>5kb
	H222	pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry	N/A	mCherry	mCMV	3FLAG	>5kb
	H12588	pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mNeonGreen	CMV	3FLAG	>4kb
	H12589	pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mScarlet	CMV	3FLAG	>4kb
circRNA过表达	H6946	pADV-CMV-S-circRNA	N/A	N/A	CMV	N/A	>5kb
miRNA过表达	H216	pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
表达cre	K0024	pADV-CMV-Cre	N/A	N/A	CMV	N/A	N/A
干扰	DKD001	pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
干扰	DKD004	pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry	N/A	mCherry	U6	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5064	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9	N/A	N/A	U6	3FLAG	N/A
	H9350	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	sfGFP	U6	3FLAG	N/A
	H5066	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	H218	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A
	H5449	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A

应用实例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]

　　感染部位：肝脏

　　载体名称：Ad-CBS

　　注射方式：尾静脉

　　注射量：1 x10¹¹PFU/mL，10ul

　　检测时间：7天

　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]

　　感染部位：肝脏

　　载体名称：Ad-ATG7

　　注射方式：尾静脉

　　注射量：1 x10⁹PFU /只

　　检测时间：10天

　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

　　注射部位：大鼠大脑皮层

　　载体名称：Ad-FBLN

　　注射方式：脑立体定位注射

　　注射量：三种不同剂量

　　检测时间：7天

　　尊龙凯时生物腺病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程，采用AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速密度梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在10¹⁰~10¹¹pfu/ml，完全可以满足各类实验的使用要求。

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